Quantificazione diretta delle proteine dagli spettrofotometri (metodo UV)
Questo metodo consiste nel testare la proteina direttamente a una lunghezza d'onda di 280 nm. Selezionare la formula di Warburg, il fotometro può mostrare direttamente la concentrazione del campione o selezionare il metodo di conversione appropriato per convertire il valore di assorbanza alla concentrazione del campione. Il processo di determinazione delle proteine è molto semplice. Prova prima il bianco e poi prova direttamente la proteina. A causa della presenza di alcune impurità nel buffer, l'informazione di "sfondo" a 320 nm viene generalmente eliminata e questa funzione è impostata su "ON". Simile all'acido nucleico di prova, il valore di assorbanza di A280 è richiesto per essere almeno maggiore di 0,1 A, e l'intervallo lineare ottimale è compreso tra 1,0-1,5. Quando la formula di Warburg è stata utilizzata per mostrare la concentrazione del campione nell'esperimento, la lettura è risultata essere "alla deriva". Questo è un fenomeno normale. Infatti, finché l'osservazione del valore di assorbanza di A280 non supera l'1%, il risultato è molto stabile. Il motivo della deriva è che il valore di assorbanza della formula di Warburg viene convertito in concentrazione e moltiplicato per un determinato fattore. Finché c'è un leggero cambiamento nel valore di assorbanza, la concentrazione sarà amplificata e il risultato sarà molto instabile. I metodi di quantificazione diretta delle proteine sono adatti per testare proteine relativamente semplici e relativamente monocomponenti. La quantificazione diretta UV è più veloce e più facile da eseguire rispetto alla colorimetria; tuttavia, è suscettibile di interferenze da sostanze parallele, come l'interferenza del DNA, e bassa sensibilità richiede alte concentrazioni di proteine.
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